Personnages principaux :
 | Dean Winchester (Jensen Ackles) Dean est le frère aîné de Sam. Elevé comme lui pour devenir un chasseur ("hunter"), c'est un jeune homme plutôt impulsif mais plein d'humour, et surtout qui est prêt à tous les sacrifices pour son frère et sa famille. |
 | Sam Winchester (Jared Padalecki)
Après la perte de sa mère, Sam part avec son frère, à travers le pays pour retrouver le démon qui l'a tué. Mais il découvre bien vite qu'il a un puissant pouvoir mental et que les forces du mal s'intéressent à lui... |
Personnages secondaires :
 | Ruby (Katie Cassidy) Ruby est un démon, qui semble être déterminé à aider les deux frères dans leur lutte contre les forces infernales. Mais quel est son but réel ? Et Dean & Sam peuvent-ils vraiment lui faire confiance ? |
 | Bela Talbot (Lauren Cohan) Bela talbot est une jeune femme splendide mais qui cache un personnage peu fréquentable, cynique et intéressé, puisqu'elle est une chasseuse d'objets surnaturels et qu'elle est prête à tout pour les obtenir... |
 | Bobby Singer (Jim Beaver) Bobby est un ami de John Winchester, le père de Sam & Dean. Un peu austère au prime abord, il est en fait un ami fidèle qui les aidera dans bien des épreuves contre les forces du mal. |
Personnages récurrents :
 | John Winchester (Jeffrey Dean Morgan) John est le père des deux frères Winchester. C'est un homme déterminé et qui a, pendant leur jeunesse, formé Dean et Sam à devenir des chasseurs, comme lui. Son recueil de notes les guide dans leurs chasses. |
 | Meg Masters (Nicki Lynn Aycox) Meg est une jeune femme que Sam a rencontré lors d'auto-stop. Ils se lient d'amitié, mais celle-ci se révèle être possédée par une entité démoniaque et devient l'ennemie des frères Winchester. |
 | Jo Harvelle (Alona Tal) Jo Harvelle est la fille d'Ellen. Bien que jeune, c'est une jeune femme forte et bien déterminée à devenir un jour chasseuse. C'est pourquoi elle appuie Sam & Dean pendant quelques-une de leurs missions. |
 | Ellen Harvelle (Samantha Ferris) Ellen Harvelle est une vieille connaissance de John. Veuve d'un chasseur, elle est la mère de Jo et tient le Harvelle's Roadhouse, un saloon, véritable repère de chasseurs... |
 | Gordon Walker (Sterling K. Brown) Gordon a vu sa petite soeur se faire attaquer par un vampire alors qu'il avait 18 ans. Depuis il est devenu un redoutable chasseur de vampires, mais complètement fanatique et sans pitié... |
 | Mary Winchester (Samantha Smith) Mary Winchester est la défunte épouse de John. C'est la mère de Sam & Dean, et elle a été assassinée par le démon Azazel alors qu'ils étaient encore enfants... |
 | Azazel (Fredric Lehne) Souvent appelé le "démon aux yeux jaunes", Azazel est un démon puissant qui est à l'origine de la mort de la mère des frères Winchester et de celle de Jessica, la petite amie de Sam... |
 | Lilith (Rachel Pattee) Lilith est un démon majeur qui en a après Sam, qu'elle juge être un véritable rival à son hégémonie. Apparaissant sous les traits d'une fillette innocente, elle est en fait extrêmement puissante et maléfique. |
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